Агглютинация эритроцитов вирусами гриппа

Для постановки ориентировочной РГА на предметное стекло наносят каплю 5% взвеси эритроцитов и каплю испытуемого материала, тщательно смешивают. При положительном результате через 1-2 минуты макроскопически наблюдают появление хлопьевидной агглютинации эритроцитов.

Показания к проведению анализа.

Серологические исследования широко применяется в акушерстве

Серологические исследования сопровождают современного человека на протяжении всей жизни. Первые анализы на выявление определённых антител проводятся, когда малыш находится ещё в утробе. Беременная женщина сдаёт кровь на различные СИ для определения возможного резус-конфликта либо инфекций, способных навредить вынашиваемому плоду. Когда ребёнок появляется на свет, его ожидают серологические исследования, позволяющие диагностировать врождённые заболевания. Впоследствии анализы сдаются по следующим причинам:

Показания к проведению анализа.
  • вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции;
  • выявление активности, стадии развития болезни;
  • гормональные патологии;
  • бесплодие;
  • аутоиммунные заболевания;
  • нарушение обмена веществ;
  • аллергии;
  • онкологические заболевания;
  • планирование беременности, период вынашивания, патологии беременных;
  • выявление ревматоидного фактора;
  • определение группы крови и резус-фактора;
  • эффективность терапии при различных болезнях;
  • эффективность вакцинации;
  • предоперационный и постоперационный период при необходимости оценки уровня некоторых антител;
  • изучение иммунного состояния организма.

Вирус гриппа или взвесь агглютинация

парагриппа + эритроцитов = эритроцитов

Принцип реакции торможения геммаглютинация (РТГА) — основан на торможении агглютинации эритроцитов при связывании антигена специфической сывороткой.

Иммунная вирус гриппа взвесь торможение

сыворотка + (парагриппа) + эритроцитов = агглютинации

Реакция агглютинации (от лат. agglutinatio – склеивание> – склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов – натрия хлорида.

Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например, бактерий), “склеенных” антителами.

РА используют для: определения возбудителя, выделенного от больного; определения антител в сыворотке крови больного; определения групп крови

1. Определение возбудителя, выделенного от больного

Ориентировочная реакция агглютинации на стекле. К капле агглютинирующей сыворотки (разведение 1:20) добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.
Р азвернутая реакция агглютинации с возбудителем, выделенным от больного. К разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного.

2. Определение антител в сыворотке крови больного

Развернутая реакция агглютинации с сывороткой крови больного. К разведениям сыворотки больного добавляют диагностикум. Агглютинация с О — диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие О-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации. Агглютинация с Н — диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие жгутиковый Н-антиген) – крупнохлопчатая и протекает быстрее.
Читайте также:  Топ 10 антибиотиков широкого спектра действия нового поколения

3. Реакция агглютинации для определения групп крови

Реакцию агглютинации для определения групп крови применяют для установления системы АВ0 с помощью агглютинации эритроцитов антителами иммунной сыворотки против антигенов групп крови А(II), В(III). Контролем служат: сыворотка, не содержащая антител, т.е. сыворотка AB(IV) группы крови; антигены, содержащиеся в эритроцитах групп А(II), B(III). Отрицательный контроль не содержит антигенов – используют эритроциты группы 0(I). Определение групп крови АВ0
Результаты реакции

Групповая принадлежность исследуемой крови

эритроцитов со стандартными сыворотками

сыворотки (плазмы) со стандарт. эритроцитами

анти-А анти-В A(II) B(III)
+ + 0(I)
+ + A(II)
+ + B(III)
+ + AB(IV)

отрицательная РА (–) положительная РА (+)

РЕАКЦИЯ НЕПРЯМОЙ (ПАССИВНОЙ) ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА, РПГА)

В РНГА выявляют антитела сыворотки крови с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами.

Антигенный эритроцитарный диагностикум

Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде пуговки

Реакция непрямой (пассивной) агглютинации РПГА ставят в пластиковых планшетках или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум.

Иногда применяют антительный эритроцитарный диагностикум — эритроциты, на которых адсорбированы антитела. Например, можно обнаружить ботулинический токсин, добавляя к нему эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемагглютинации – РОНГА).

Реакция обратной непрямой гемагглютинации

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

В этом случае реакцию называют реакция латекс агглютинации (РЛА) или используют золотистый стафилококк — реакция коагглютинации и т. д. Обычно эритроцитарные диагностикумы готовят на предприятиях биологической промышленности, а в диагностических лабораториях ставят уже главный опыт РНГА.

Приготовление эритроцитарных диагностикумов включает следующие этапы:

  • фиксация эритроцитов формальдегидом или глютаровым, или акриловым альдегидами.

    Такие обработанные эритроциты длительно сохраняются. Чаще для этой цели используют эритроциты барана, человека, кур и др.;

  • обработка фиксированных эритроцитов раствором танина. В результате эритроциты приобретают свойство необратимо адсорбировать на своей поверхности белки (вирусы и антитела);
  • сенсибилизация танизированных эритроцитов вирусами или антителами.

Необходимо отметить, что методы приготовления эритроцитарных диагностикумов для вирусных инфекций различна.

Методика постановки РНГА для обнаружения и определения титра антител заключается в следующем:

  • к последовательным 2-кратным разведениям сыворотки добавляют равные дозы эритроцитов, сенсибилизированных антигеном;
  • смесь оставляют на 2-3 ч при комнатной температуре или на 16-18 ч при 4 °С;
  • учитывают результаты.

    Если в сыворотке содержатся антитела к вирусу, которым были сенсибилизированы эритроциты, наблюдают гемагглютинацию, которую оценивают в крестах.

За титр антител в сыворотке принимают наивысшее разведение сыворотки, которое еще обеспечивает гемагглютинацию не менее чем на два креста.

РНГА сопровождается всеми соответствующими контролями. Обычно ставят реакцию микрометодом.

РНГА позволяет решать следующие диагностические задачи:

  • обнаружить антитела и определить их титр в сыворотке крови с помощью известного эритроцитарного антигенного диагностикума;
  • обнаружить и идентифицировать неизвестный вирус с помощью известного эритроцитарного антительного диагностикума.

Достоинства РНГА: высокая чувствительность, простота техники постановки и быстрота ответа.

Однако важно отметить, что возникают большие трудности в приготовлении стабильных эритроцитарных диагностикумов (большая зависимость от чистоты используемых компонентов, необходимость подбора режима фиксации, танизации и сенсибилизации эритроцитов для каждого вида вируса).

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Вконтакте

Одноклассники

В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела.

Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами. называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.

Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

Реакция пассивной гемагглютинации является чувствительным методом серологической диагностики и используется как для ранней, так и ретроспективной диагностики, а также для определения иммунопогического состояния привитых. У больных туляремией aнтитела обычно обнаруживаются в конце 1-ой или на 2-ой неделе заболевания, через 1-1,5 месяца титры РПГА достигают максимальных показателей (1:100000- 1:20000, реже выше), после чего снижаются и на уровне 1:100-1:200 сохраняются длительное время.

У привитых антитела также обнаруживаются постоянно, однако, в более низких титрах, не превышающих 1:2000-1:5000 через 1-1,5 месяца после вакцинации, сохраняются в течение нескольких лет на низком уровне 1:20-1:80.

Антигеном для постановки РПГА служит туляремийный эритроцитарный диагностикум (антигенный).

Препарат представляет собой формалинизированные эритроциты барана, сенсибилизированные туляремийным антигеном, выпускается в жидком и сухом виде. Жидкий препарат — 10%-ная взвесь эритроцитов в растворе формалина 10%-ной концентрации. Сухой лиофилизированный препарат — высушенная в вакууме 10%-ная взвесь эритроцитов без консерванта. Перед употреблением его разводят в соответствии с указаниями на этикетке. Для постановки реакции в полистироловых пластинах оба препарата применяют в 2,5%-ной концентрации, а при постановке реакции в микрообъемах — в 0,5%-ноq концентрации.

Техника постановки РПГА.

Испытуемые сыворотки разводят физиологическим раствором 1:5 (1:10) и прогревают при 56 град.С в течение 30 минут.

Как прочитать результаты анализов

При проведении серологического теста в бланке ставится отметка «+» и указывается выявленное число антител. При их отсутствии результат считается отрицательным и обозначается «-».

Сразу после заражения и в первые дни болезни многие тест-системы не обнаруживают антитела. Если при отрицательном результате человек испытывает симптомы брюшного тифа, ему нужно повторно сдать анализы. Такой показатель может диагностироваться сразу после болезни.

Положительный («+») ответ лаборатории указывает на протекание патологии в острой стадии. Иногда антитела выявляются у людей, недавно перенесших заболевание.

Среди пациентов, переболевших брюшным тифом, постоянными бактерионосителями становятся только 4% больных. Человек не испытывает неприятных проявлений инфекции, но может ее распространять.

Внимание! В редких случаях может диагностироваться ложноположительный результат анализа на брюшной тиф.

Трактовать результаты лабораторной диагностики и, основываясь на них, назначать лечение должен врач. Для постановки диагноза и подбора терапии лабораторных данных недостаточно — необходимо проведение эпидемиологического обследования. Для определения тяжести патологии применяют инструментальную диагностику — УЗИ и рентген органов брюшной полости, кардиографию.